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決明子中黃曲霉含量檢測的免疫親和柱法
  • 決明子中黃曲霉含量檢測的免疫親和柱法

產(chǎn)品描述

簡介

黃曲霉(AFT)是一種毒性很強的肝, 可引起肝臟的急慢性損害, 同時還對等其他多種組織造成影響, 并具有致癌、致畸、致細胞突變的作用。 ATF廣泛存在于玉米、麥類、稻谷等農(nóng)產(chǎn)品以及堅果、花生和動物飼料中,近年來, 有陸續(xù)報道我國中草藥材上ATF污染也很嚴重,。

為此,我國不斷擴大對材中黃曲霉含量的檢測領(lǐng)域,并制定相關(guān)檢測標準以加強對材的質(zhì)量管控。

黃曲霉總量的測試方法

實驗耗材:黃曲霉總量免疫親和柱

參照標準:《中國藥典2015年版第四部》

實驗部分

一、樣品提取

準確稱取5.0 g粉碎后決明子樣品置于50mL離心管中,加入1 g,加入25 mL 70%甲醇溶液,于渦旋儀上渦旋2min,在5000 r/min下離心5min,取5 mL上清液,用水定容至20 mL,過濾,取10 mL待凈化。

二、免疫親和柱凈化

(1) 上樣:將20 mL上樣器連接于免疫親和柱上端,取待凈化液以1-2滴/秒的速度通過免疫親和柱,棄掉流出的液體。

(2) 淋洗和洗脫:用20 mL水淋洗柱子,分兩次淋洗,棄去流出的液體;抽干小柱;加入2×1 mL甲醇洗脫,抽干小柱,收集洗脫液。

(3) 重新溶解:洗脫液在45℃氮吹至近干,0.5 mL初始流動相復溶,混勻,經(jīng)0.22 μm濾膜過濾,供上機測試。

三、儀器條件

儀器測試條件(僅供參考)

3.1 液相條件

儀 器:UPLC/MS/MS (Thermo Fiaher TSQ Endura ) 進樣量: 4 μL
色譜柱:CommaSilTM HILIC(2.1mm×100 mm, 3 μm) 柱 溫: 30 ℃
流動相:A:10 mmol/L 乙酸銨溶液 B:乙腈 流 速: 0.3 mL/min

表1 梯度洗脫

時間/min A% B%
0 90 10
3 60 40
4.5 55 45
6.5 35 65
10 60 40

3.2質(zhì)譜條件

離子源:HESI,正離子監(jiān)測 電噴霧電壓:3500 V
鞘氣壓力:2 arb 輔氣壓力: 1 arb
離子傳輸管:275℃ 輔氣溫度:350℃
采集方式: 多反應(yīng)監(jiān)測(SIR)  

四、實驗結(jié)果

表2. 決明子中0.02 mg/kg黃曲霉B1,黃曲霉G1和0.007mg/kg黃曲霉B2,黃曲霉G2的添加回收結(jié)果

1決明子中的黃曲霉B1

圖1. 添加水平為0.02 mg/kg決明子中的黃曲霉B1檢測的LCMS/MS色譜圖

2決明子中的黃曲霉 B2

圖2. 添加水平為0.007 mg/kg決明子中的黃曲霉B2檢測的LCMS/MS色譜圖’

3決明子中的黃曲霉G1

圖3. 添加水平為0.02 mg/kg決明子中的黃曲霉G1檢測的LCMS/MS色譜圖

4決明子中的黃曲霉G2

圖4. 添加水平為0.007 mg/kg決明子中的黃曲霉G2檢測的LCMS/MS色譜圖

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